Anthony Mackie s-a născut în New Orleans, Lousiana, pe 23 septembrie 1979. Este fiul Marthei G. și al lui Willie Mackie. El a frecventat NOCCA ( New Orleans Center for Creative Arts ). A absolvit North Carolina School of the Arts, secțiunea de teatru, iar mai târziu a absolvit Juilliard School, unde a fost coleg cu actorii Tracie Thomas și Lee Pace. El a apărut în anul 2002în filmul 8 Mile ca Papa Doc,rivalul lui Eminem. În martie 2008, Mackie a jucat în trei piese scrise de dramaturgul August Wilson, la John F. Kennedy Center for the Performing Arts în Washington DC: Ma Rainey's Black Bottom, Fences și Jitney. Anthony l-a interpretat pe rapperul Tupac Shakur în ianuarie 2009, în filmul Notorious. În vara anului 2009, el a jucat rolul lui Pentheus în piesa Shakespeare jucată la Teatrul public din New York. În vara anului 2011 a deschis barul NoBar în Brooklyn, New York. El a fost nominalizat ca cel mai bun actor în rol secundar în 2009 la Independent Spirit Awards pentru rolul său din The Hurt Locker. Aceasta este a doua nominalizare a lui Anthony la ISA, prima fiind în 2003 pentru rolul din filmul Brother to Brother la categoria Cel mai bun actor. În 2011 a jucat alături de Matt Damon în filmul The Adjustment Bureau, unde în interpretează pe Harry Mitchell, un membru simpatizant al unui grup de supranatural care controlează destinul uman.