Jesse Spencer s-a nascut in Melbourne, Australia. Are doi frati, Tarney si Luke, si o sora, Polly. Tatal sau, Rodney Spencer si mama sa, Robyn, au fondat partidul politic anti-imigratie "Australieni impotriva viitoarei imigratii". Jesse Spencer a absolvit universitatea "Scotch". In timpul facultatii, a primit un rol in telenovela "Neighbours". Intr-un interviu acordat unei reviste, actorul a dezvaluit ca, atunci cand locuia la Londra, a fost coleg de camera cu James McAvoy. Spencer este cunoscut in Australia si Marea Britanie ca Billy Kennedy, din telenovela australiana "Neighbours", un rol pe care l-a interpretat timp de sase ani, din 1994 pana in 2000. De atunci a aparut in drama "Death in Holy Orders" si in "Uptown Girls" si "Swimming Upstream". Acum locuieste in Statele Unite si joaca rolul lui Dr. Robert Chase in serialul "House", alaturi de Hugh Laurie. De asemenea, a jucat si in filmul "Flourish" alaturi de logodnica sa de atunci, Jennifer Morrison".
Incepand cu anul 2008, Jesse canta la vioara in grupul "Band from TV", formatie infiintata de Greg Grunberg.
Spencer s-a logodit cu partenera din serialul "House", Jennifer Morrison, pe 23 decembrie 2006, dupa o cerere in casatorie la Paris. Conform interviului dat de Spencer si Morrison in revista "In Style Weddings", cuplul s-a cunoscut pe Aeroportul International din Vancouver, de unde mergeau sa filmeze primul episod din serialul "House".