John Glover s-a nascut la 7 august 1944 in Kingston, New York. A terminat Wicomico High School si a inceput sa joace la Towson University.
Unul din primele sale roluri a fost in White Nights, in rolul unui diplomat american. A jucat in numeroase filme si seriale printre care : Scrooged, 52 Pick-Up, Payback, Robocop 2, Night of the Running Man, Batman & Robin, Brimstone, Star Trek : Deep Space Nine, Miami Vice, Murder : She Wrote.
In 1985 a aparut in filmul de televiziune An Early Frost in rolul unui pacient bolnav de SIDA, rol pentru care a primit o nominalizare la premiile Emmy. In 1994 a primit de asemeni o nominalizare la Emmy pentru rolul din sitcomul Frasier.
Este foarte cunoscut pentru rolul din serialul Smalville, unde il interpreteaza pe Lionel Luthor, tatal lui Lex Luthor. Glover si-a interpretat personajul timp de 6 sezoane, in perioada 2001-2007. A castigat un premiu Tony pentru rolul din drama Love! Valour! Compassion! din 1997. Drama este adaptarea piesei lui Terrence McNally si are in centru un grup de prieteni care se reunesc pentru un week-end la casa de vacanta a unuia dintre ei. Filmul vorbeste cu umor si sensibilitate despre relatiile de prietenie si iubire care iau nastere sau se destrama in cadrul grupului, iar Glover a interpretat dublu rol, cel al fratilor gemeni John si James.
In 2009 a aparut in soap-opera Brothers & Sisters a canalului ABC. A aparut in numeroase carti audio ca narator si a interpretat diverse roluri in piese radio ale LA Theatre Works. A dat viata personajului negativ Abraxas in jocul video Tron: Evolution.
