Margo Martindale s-a născut la data de 18.07.1951, în Jacksonville, Texas. Părinții ei au fost Margaret (Pruitt) și William Everett Martindale, proprietar al unei companii de cherestea și antrenor de câini. Este cea mai mică dintre cei trei copii și singura fiică. Margo a urmat Colegiul Lon Marris, ulterior s-a transferat la Universitatea din Michigan la Ann Arbor, și a studiat la Universitatea Harvard. Și-a făcut debutul în filmul Zilele tunetului (1990), în care a jucat rolul Donna. Printre rolurile ei notabile se numără Sora Colleen, din filmul Culoarul morții (1995), mama egoistă din filmul O fată de milioane (2004), dar a fost apreciată și pentru aparițiile ei din filme, ca: Orele, Pata umană, Mamă și fiu, Camera lui...