Mary Beth Peil s-a născut la 25.06.1940, în Davenport, Iowa, SUA. A studiat la Universitatea Northwestern cu Lotte Lehmann. Alți profesori care i-au influențat dezvoltarea muzicală au fost Robert Gay și Ewald Nolte, care a condus un cor universitar în care a cântat Peil. În timp ce era studentă, a fost membră a Gamma Phi Beta. În ultimul an, Peil a interpretat rolul Violettei din opera lui Giuseppe Verdi, La traviata, un spectacol la care a participat Boris Goldovsky. Peil a primit o invitație la o audiție pentru compania de operă a lui Goldovsky pentru un turneu național. I s-a oferit un contract și s-a mutat la New York. Ea și-a făcut debutul ca Violetta în toamna anului 1962 cu Teatrul de Operă Goldovsky. În 1964 a câștigat două concursuri majore de canto, Audițiile Internaționale pentru Tineri Artiști de Concert și Audițiile Consiliului Național al Operei Metropolitane. Acesta din urmă i-a adus un contract cu Compania Națională Metropolitan Opera, alături de care a cântat în două sezoane de turnee naționale ca soprană de top, din 1965 până în 1967. În 1965, Peil a fost soprană solistă într-un concert în cinstea lui Risë Stevens la The Beverly Hilton. În același an, a interpretat rolul Paminei în Flautul fermecat la Philharmonic Hall. În 1966, a fost soprană solistă în spectacolele Dies Irae la Festivalul de Muzică Moraviană Americană timpurie de la Colegiul Salem. În 1968, ea a participat la recitalul din New York, din Carnegie Hall. Ea a cântat și cu Opera din New York în 1972. A cântat ca muzician de cameră la sfârșitul anilor 1960 și 1970, adesea împreună cu soțul ei de atunci, clarinetistul Jerry Kirkbride. Ambii au fost membri ai Ansamblului de Cameră Divario în 1969 și 1970. În 1976, cei doi au fost artiști invitați cu Boehm Quintette într-un concert organizat de New York Flute Club intitulat The Flute In American Music, Concert de comemorare a Bicentenarului Independenței Statelor Unite la Carnegie Hall. A fost soprana solistă într-un concert de cantate Bach cu Cvartetul Hampshire la Alice Tully Hall în 1972. La mijlocul anilor 1970 a cântat cu ansamblul de operă de cameră Musical Arts Studio, inclusiv spectacole la Biblioteca Congresului în 1973. În 1977, a fost într-un concert de Gerald Ginsburg la Alice Tully Hall. Ea a portretizat-o pe Leonora în premiera piesei Maskarade, în 1972. A cântat în opere în anii 1970, remarcându-se în rolul Alma din piesa Summer and Smoke la Opera din Minnesota, în 1971. Ea a înregistrat acel rol pentru televiziunea americană în 1982. Cu aceeași companie de operă, ea a trecut la teatrul muzical, interpretând rolul principal din Kiss Me, Kate de Cole Porter, în 1983. În acel an s-a alăturat turneului național The King and I, în rolul Anna Leonowens și a continuat cu acea producție pe Broadway, pe 7 ianuarie 1985. A fost nominalizată la un premiu Tony pentru rolul ei. În 1986, Peil a jucat în piesa The Impromptu of Outremont la Lincoln Theatre, în muzicalul de pe Broadway Birds of Paradise (1987), ea a portretizat pe Desiree Armfeldt în A Little Night Music (1988), a jucat în Cymbeline de Shakespeare (1989), a interpretat-o pe secretara președintelui JFK în Over Texas, în 1991. În același an, a jucat în Poveștile din Viena. Ea a primit un premiu Obie și a fost nominalizată la un premiu Drama Desk, un premiu Helen Hayes și două premii Outer Critics Circle. A primit o a doua nominalizare la Tony în 2017 pentru portretul împărătesei văduve Maria Feodorovna în Anastasia. În 1992 și-a făcut debutul în film într-un rol mic din Jersey Girl și și-a făcut prima apariție la televiziune în 1994, în producția Law & Order. În 1994, ea a jucat în trei piese într-un act de Edward Albee: Box (1968), The Sandbox (1960) și Finding the Sun (1983). Peil a câștigat un premiu Obie în 1995 pentru munca sa în trei piese non-muzicale de pe Broadway: The Naked Truth (rolul Nan, 1994), A Cheever Evening (rolul Peaches, 1994), Missing Persons (1995, rolul Addie). În 1996 și 1997, a făcut un turneu în Gurney's cu Sylvia, în June Moon și a interpretat-o pe Hesione în Triumful dragostei. Peil a interpretat pe evanghelistul Aimee Semple McPherson și pe Prima Doamnă Lou Henry Hooer în 1998 la Greenwich House Theatre. În mai 1999, Peil a interpretat-o pe Judith în piesa Hay Fever. Ea a jucat rolul femeii cerșetoare din Sweeney Todd în 2002, iar în primăvara lui 2003 a jucat rolul mamei personajului lui Antonio Banderas pe Broadway, în musicalul Nine. În iarna lui 2003, ea a apărut în Frame 312, piesa despre asasinarea lui John F. Kennedy. A jucat în două seriale de televiziune: Dawson's Creek (rolul Evelyn Grams Ryan, 1998–2003) The Good Wife (rolul Jackie Florrick, 2009–2016). A mai jucat în producții, precum: Democracy and Esther (1992), Comfortably Numb (1993), The Odd Couple II (1999), The Reagans (2003, rolul Edith Luckett), The Stepford Wives (2004), Flags of Our Fathers (2006), Mirrors (2008), Maladies (2012), Contest (2013), Collateral Beauty (2016), The Song of Sway Lake (2018), Aici și acum (2018), The Village (2019), Katy Keene (2020), Halston (2021). În 2020, a fost nominalizată la Daytime Emmy Award pentru cel mai bun interpret într-un serial de dramă digital, pentru rolul Helen din After Forever. În plan personal, în 1993, Peil s-a mutat în New York după ce a divorțat de Jerry Kirkbride, cu care a crescut doi copii, Gwyneth și Michael, în Leonia, New Jersey.